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PT全波長酶標儀其核心的操作流程如下

更新時間:2025-08-21點擊次數(shù):415
  PT全波長酶標儀是一種集紫外-可見光吸收、熒光、化學(xué)發(fā)光等多種檢測模式于一體的高精度分析儀器,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、臨床診斷、藥物研發(fā)及食品安全等領(lǐng)域。其核心優(yōu)勢在于寬波長覆蓋(通常190-1000nm)與多功能檢測能力,可滿足從基礎(chǔ)科研到工業(yè)生產(chǎn)的多樣化需求。其基于光吸收定律(比爾-朗伯定律),通過光源發(fā)射特定波長光,經(jīng)樣品吸收后,檢測器測量剩余光強度,計算吸光度(A)以確定目標分子濃度。
  PT全波長酶標儀的操作需結(jié)合實驗需求(如檢測模式、樣品類型)進行參數(shù)設(shè)置和流程控制,核心步驟包括“準備-設(shè)置-檢測-數(shù)據(jù)處理”,以下是通用操作流程:
  一、操作前準備
  樣品與試劑準備
  確保待檢測樣品(如ELISA板、核酸溶液、細胞懸液等)已按實驗方案處理完畢,且微孔板內(nèi)無氣泡、液滴掛壁(若有氣泡,可輕輕敲擊板壁去除;掛壁液滴需用紙巾吸干邊緣)。
  準備空白對照、標準品、質(zhì)控品,按預(yù)設(shè)布局排列在微孔板中(建議記錄孔位布局,避免混淆)。
  儀器與環(huán)境檢查
  確認酶標儀電源線連接正常,開機前檢查樣品室是否清潔(無灰塵、液體殘留),必要時用無塵布擦拭。
  若實驗需溫控(如37℃孵育)或震蕩,提前確認儀器相關(guān)功能正常(如溫控模塊是否能達到設(shè)定溫度)。
  打開電腦及酶標儀電源,啟動配套操作軟件,等待儀器自檢完成(通常顯示“就緒”狀態(tài))。
  二、檢測方法設(shè)置
  選擇檢測模式
  根據(jù)實驗類型在軟件中選擇對應(yīng)的檢測模式:
  吸收光檢測(如ELISA、核酸定量):需設(shè)置檢測波長(如450nm主波長、630nm參比波長)、帶寬(默認1-5nm)。
  熒光檢測:需設(shè)置激發(fā)波長(如485nm)、發(fā)射波長(如535nm),并選擇頂部/底部讀數(shù)(液體樣品通常選頂部,細胞培養(yǎng)物可選底部)。
  化學(xué)發(fā)光檢測:無需設(shè)置波長,直接選擇“化學(xué)發(fā)光”模式,注意關(guān)閉樣品室光源以減少干擾。
  動力學(xué)檢測:需額外設(shè)置檢測時間間隔(如每10秒讀一次)、總檢測時長(如30分鐘),并開啟溫控(若需恒溫反應(yīng))。
  設(shè)置微孔板參數(shù)
  選擇微孔板規(guī)格(如96孔板、384孔板),并定義檢測范圍(如“全板檢測”或指定特定孔位,如A1-H12)。
  若需排除邊緣效應(yīng)或部分孔位,可在軟件中標記“不檢測”孔。
  輔助功能設(shè)置
  溫控:若反應(yīng)需恒溫(如酶促反應(yīng)在37℃),設(shè)置目標溫度(誤差通常±0.1℃),并等待儀器預(yù)熱至設(shè)定溫度。
  震蕩:檢測前需混勻樣品時,設(shè)置震蕩模式(如線性震蕩)、轉(zhuǎn)速(如500rpm)和時間(如10秒)。
  參比波長校正(吸收光檢測):開啟“雙波長檢測”,通過參比波長(如630nm)扣除背景干擾(如微孔板劃痕、氣泡),提高數(shù)據(jù)準確性。
  三、樣品檢測
  加載微孔板
  輕輕將微孔板放入樣品室的托盤上,確保板邊緣與托盤定位槽對齊(避免位置偏移導(dǎo)致讀數(shù)錯誤),關(guān)閉樣品室門。
  啟動檢測
  在軟件中點擊“開始檢測”,儀器自動按預(yù)設(shè)方法運行,屏幕實時顯示檢測進度(如已完成的孔位、當(dāng)前讀數(shù))。
  檢測過程中避免觸碰儀器或打開樣品室門,以防干擾光路穩(wěn)定性。
  四、數(shù)據(jù)處理與導(dǎo)出
  查看實時結(jié)果
  檢測完成后,軟件自動生成原始數(shù)據(jù)(如吸光度值、熒光強度),并以表格或熱力圖形式展示。
  可查看單孔數(shù)據(jù)、平均值(如標準品重復(fù)孔的均值),或生成標準曲線(若設(shè)置了標準品濃度)。
  數(shù)據(jù)分析
  根據(jù)實驗需求進行數(shù)據(jù)處理:
  定量分析(如ELISA):通過標準品濃度和對應(yīng)信號值擬合標準曲線(線性、四參數(shù)擬合等),軟件自動計算未知樣品濃度。
  比值計算(如核酸純度):吸收光檢測中自動計算260/280nm、260/230nm比值,評估樣品純度。
  動力學(xué)曲線:生成“信號值-時間”曲線,可計算反應(yīng)速率、半衰期等參數(shù)。
  數(shù)據(jù)導(dǎo)出與保存
  將數(shù)據(jù)保存為軟件默認格式(如.csv、.txt),或?qū)С鲋罞xcel、PDF格式用于報告撰寫。
  建議同時保存檢測方法模板(下次相同實驗可直接調(diào)用,無需重復(fù)設(shè)置)。
  五、操作后整理
  關(guān)閉儀器
  檢測完成后,取出微孔板,清理樣品室(若有液體泄漏需及時擦拭)。
  依次關(guān)閉酶標儀軟件、儀器電源和電腦電源。
  記錄與清潔
  記錄實驗信息(如檢測日期、儀器型號、方法參數(shù)),便于數(shù)據(jù)追溯。
  定期清潔樣品室和托盤(用75%酒精擦拭,避免腐蝕性試劑殘留),長期不用時需覆蓋防塵罩。
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